卵巢组织内富含卵泡、间质细胞及基质纤维，机械研磨易损伤颗粒细胞，酶解不当则会导致活率骤降。传统摇床方案因无法标准化转速、温度与时间，批次间重复性差、细胞碎片多，制备过程既耗力又耗时。上海william威廉中文官网JX-CKSM-4WK磁珠款单细胞悬液制备仪，以磁珠剪切 + 酶离者酶解的组合策略，让小鼠卵巢单细胞悬液制备一步到位！

卵巢单细胞制备，为何这么难？

1. 研磨损伤大：机械剪切力过强，颗粒细胞破膜率高，台盼蓝染色死细胞比例上升。

2. 酶解不稳定：摇床转速、温度难以精控，消化时间凭经验，批次重复性差。

3. 碎片干扰多：基质纤维断裂产生大量细胞碎片，下游流式/测序质控繁琐。

4. 操作者依赖：传统方案高度依赖操作者经验，换人后数据不可复现。

小鼠悬液单细胞制备完整流程

1. 仪器预备：连接JX-CKSM-4WK单细胞制备仪的电源，开机后预热，在主菜单选取卵巢专用程序，待机备用。

2. 试剂解冻：酶离者消化酶（MJ022 通用解离酶）与终止液（MJ102）提前用流动凉水解冻，充分混匀；切勿使用温热水，避免酶活性损失。

3. 取材与预处理：小鼠颈椎脱臼处死后迅速取出双侧卵巢，置于盛有 PBS 的培养皿中冰上保存，用眼科剪将组织充分剪碎（1–2 mm³），减小酶解阻力。

4. 装管加酶：组织碎块用 PBS 洗涤 1 次后，转入 2 mL 消化管；加入 ~1 mL 酶离者消化酶，确保组织完全浸没。

5. 仪器运行：将消化管固定于模块，点击运行；JX-CKSM-4WK 磁珠以程序化方式旋切组织，同步完成机械匀浆与酶解。过程中可随时暂停查看进度。

6. 过滤与终止：程序结束后，用 70 μm 滤网过滤消化液；按 消化液：终止液 = 1:1 加入 MJ102 终止液，立即中止酶反应。

7. 裂红与碎片去除：滤液离心（400 g × 5 min），弃上清；沉淀中加入 2 mL MJ103 红细胞裂解液（含 200 μL FBS），冰上孵育 3–5 min；随后加入 500 μL PBS + 1 mL MJ101 碎片去除剂，离心弃上清，PBS 洗涤细胞 2 次。

8. 重悬 & 计数：加入适量无菌 PBS 轻柔重悬底部细胞沉淀，即得单细胞悬液。显微镜观察细胞形态，细胞计数仪检测活率与浓度。

实验结果分析

镜下观察显示细胞分散良好、形态完整，无明显聚团或细胞碎片堆积。细胞计数仪结果确认活细胞比例稳定，满足下游流式细胞术及单细胞测序建库要求。

实验操作的注意事项

1. 酶离者单细胞试剂盒溶解后须在–20°C低温保存，使用前用凉水解冻，切勿使用温热水，以免酶活性下降。

2. 取材后全程置于冰上操作，缩短离体时间，维持细胞活性。

3. 洗涤次数不宜过多、时间不宜过长，避免细胞机械损失，建议 PBS 洗涤不超过 2 次。

4. 70μm 滤网过滤后，用 PBS 轻柔冲洗滤膜，最大化回收单细胞。

5. 消化完成后应尽快进行下游实验，如样本组织需短期保存，可使用 MJ104 酶离者组织保存液维持活性。